厭氧菌的培養(yǎng)

更新時間：2019-05-17 | 點擊率：2324

厭氧菌在有氧的情況下不能生長，如產(chǎn)氣莢膜梭菌（魏氏梭菌）、肉毒梭菌等厭氧菌，必須在無氧條件下培養(yǎng)。皰肉培養(yǎng)法MAX簡單，無需特殊設備。厭氧罐法是應用廣泛，是用物理化學的方法使缸內(nèi)造成厭氧環(huán)境。厭氧袋法在塑料袋內(nèi)造成厭氧環(huán)境來培養(yǎng)厭氧菌。厭氧手套箱是一整套系統(tǒng)，是適用的厭氧菌培養(yǎng)法，通常用于厭氧細菌的大量培養(yǎng)研究。

厭氧菌在有氧的情況下不能生長，如產(chǎn)氣莢膜梭菌（魏氏梭菌）、肉毒梭菌等厭氧菌，必須在無氧條件下培養(yǎng)。

在厭氧培養(yǎng)時，通常用培養(yǎng)基中加入還原劑，或用物理、化學方法去除環(huán)境中的游離氧，以降低氧化還原電勢。常用的厭氧培養(yǎng)方法主要有皰肉培養(yǎng)基法、厭氧罐法、厭氧袋法、厭氧手套箱法等，可根據(jù)實際情況選用。

一、皰肉培養(yǎng)基法

皰肉培養(yǎng)基法是MAX簡單的厭氧培養(yǎng)法之一，無需特殊設備。將皰肉和肉湯裝入大試管，在液面加入凡士林封閉，從而造成無氧環(huán)境。在使用前建議將裝有培養(yǎng)基的試管沸水浴10-20min，以使培養(yǎng)基中溶解的氧釋放出來。

二、厭氧罐法

厭氧罐法是目前應用較廣泛的一種厭氧培養(yǎng)方法，是用物理化學的方法使缸內(nèi)造成厭氧環(huán)境，從而進行厭氧菌的培養(yǎng)。厭氧罐法又分為以下兩種：

1、抽氣換氣法

該法適用于一般實驗室，其特點是較經(jīng)濟，可迅速建立厭氧環(huán)境。標本接種后，將平板放入?yún)捬豕?，擰緊蓋子，用真空泵抽出罐中空氣，使壓力真空表至-79.98KPa，停止抽氣，充入高純氮氣使壓力真空表指針回0位。連續(xù)反復3次，MAX后在罐內(nèi)-79.98KPa的情況下，充入70%的N2、20% H2、10% CO2 (有人改用20% CO2及80% H2，亦可獲得好結(jié)果)。罐中需放入冷催化劑鈀粒，可催化罐中殘余的O2和H2化合成水。同時罐中應放有美藍指示管，美藍在有氧的環(huán)境下呈藍色，無氧時為紅色。臨用前首先將美藍煮沸使變成無色，放入罐中先呈淺藍色，待罐中無氧環(huán)境形成，美藍即可持續(xù)無色。

2、氣體發(fā)生袋法

氣體發(fā)生袋系由錫箔密封包裝，其中含有兩種藥片，一種為含枸椽酸和重碳酸氫鈉的藥片，另一種是含有C3H9BNaO3的藥片。前者遇水放出二氧化碳，后者可釋放氫。使用時在袋的右上角剪一小口，灌進10ml蒸餾水，立即放入含有鈀粒、指示劑及平板培養(yǎng)基的厭氧罐中，擰緊蓋子。經(jīng)2-3分鐘后，可感到蓋子微熱并有少量水蒸氣出現(xiàn)。密封后1小時左右罐中的O2的含量可低于1%。

三、厭氧袋法

厭氧袋法即在塑料袋內(nèi)造成厭氧環(huán)境來培養(yǎng)厭氧菌。該方法不需要特殊設備，操作簡單，使用方便，不但實驗室中可用，而且外出采樣，現(xiàn)場接種等也可用。原理與氣體發(fā)生袋法*相同，只是采用塑料袋代替了厭氧罐，氣袋為一透明而密閉的塑料袋，內(nèi)裝有氣體發(fā)生管（有C3H9BNaO3的碳酸氫鈉固體以及5%檸檬酸安瓿）、美蘭指示劑管、鈀催化劑管、干燥劑。其操作方法為首先將接種的平板培養(yǎng)基放入袋中，盡量擠出袋內(nèi)空氣，然后密封袋口。然后先折斷氣體發(fā)生管，20分鐘后再折斷美蘭指示劑管，如果指示劑不變藍色，說明袋內(nèi)達到厭氧狀態(tài)，即可放入37°C電熱恒溫培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。

四、厭氧手套箱法（anaerobic glove box）

厭氧手套箱是一整套系統(tǒng)，是MAX合適的厭氧菌培養(yǎng)法，通常用于厭氧細菌的大量培養(yǎng)研究。厭氧手套箱是一個密閉的大型箱，箱的前面有一個有機玻璃做的透明面板，板上裝有兩個手套，可通過手套在箱內(nèi)進行操作。厭氧手套箱可調(diào)節(jié)溫度，本身是孵箱或孵箱即附在其內(nèi)，還可放入解剖顯微鏡便于觀察厭氧菌菌落。使用時應嚴格遵守操作規(guī)程，保證箱內(nèi)氣體比例合理。